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青翹與老翹揮發(fā)油化學(xué)成分分析論文
摘要目的：研究與比較青翹和老翹中的揮發(fā)性成分。方法：采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油。采用氣相-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測(cè)定藥材中揮發(fā)油成分的含量。色譜條件：色譜柱為HP-5MS，進(jìn)樣口溫度為200℃，載氣為氮?dú)�，分流比�?0∶1，程序升溫，流速為1ml/min，進(jìn)樣量為1l；質(zhì)譜條件：離子源為電轟擊離子源，電子能量為70eV，接口溫度為280℃，離子源溫度為230℃，四極桿溫度為150℃，電子倍增電壓為2300V，質(zhì)量掃描范圍為29～350amu。結(jié)果：揮發(fā)油提取得率高低順序?yàn)榍嗦N心＞青翹＞青翹殼＞老翹；青翹、老翹揮發(fā)油有18個(gè)共有峰，均以β-蒎烯含量最高，其次為α-蒎烯、β-水芹烯、松油烯-4-醇、松油烯等；此外，4-亞甲基-1-環(huán)己酮、3-環(huán)己烯-1-甲醇、對(duì)異丙基苯甲醛、香樹(shù)烯、棕櫚酸、肉豆蔻醛6種成分僅老翹揮發(fā)油中可檢出；而α-水芹烯、羅勒烯、α-松油醇、α-松香芹酮、Z-薄荷醇、乙酸龍腦酯、α-庫(kù)比烯、大根香葉烯D8種成分僅在青翹揮發(fā)油中檢出。結(jié)論：青翹與老翹揮發(fā)油的主要化學(xué)成分基本一致，但也存在一定差異，該發(fā)現(xiàn)或許能夠?yàn)檫B翹藥效差異物質(zhì)基礎(chǔ)的研究提供一定依據(jù)。
關(guān)鍵詞：青翹；老翹；揮發(fā)油；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)；成分分析
連翹為木犀科屬植物連翹Forsythiasuspensa（Thunb.）Vahl的干燥果實(shí)，主產(chǎn)于山西、陜西、河南、山東等地，具有清熱解毒、消腫散結(jié)之功效，主治溫?zé)�、丹毒、斑疹、瘡瘍腫毒、瘰疬等證[1]。根據(jù)采收時(shí)間的不同，連翹通常分為青翹和老翹，秋季果實(shí)初熟尚帶綠色時(shí)采收的為青翹，除去雜質(zhì)，蒸熟，曬干而成；老翹為果實(shí)熟透時(shí)采收，除去雜質(zhì)，曬干而成[1]。揮發(fā)油類(lèi)成分作為其主要有效成分之一，在以往的文獻(xiàn)報(bào)道中，大都是研究連翹揮發(fā)油的化學(xué)成分和藥理作用，并認(rèn)為連翹揮發(fā)油具有顯著而穩(wěn)定的抗菌、抗病毒作用[2]。而關(guān)于青翹和老翹揮發(fā)油化學(xué)成分之間的差異尚未見(jiàn)報(bào)道。因此，筆者嘗試采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）對(duì)其揮發(fā)油成分進(jìn)行分析，以期為青翹和老翹的藥效差異物質(zhì)基礎(chǔ)的研究提供一定依據(jù)。
1材料
1.1儀器6890GC-5973MS型GC-MS儀（美國(guó)Agilent公司）；DV215CD型電子分析天平（美國(guó)Ohaus公司）；全玻璃揮發(fā)油提取器（天津玻璃儀器廠）；DFY-600C型萬(wàn)能粉碎機(jī)（上海比朗儀器制造有限公司）。1.2試劑三氯甲烷、無(wú)水硫酸鈉均為分析純，水為純化水。1.3飲片青翹和老翹（亳州成源中藥飲片有限公司，批號(hào)均為20140703、150103；山西振東制藥有限公司，批號(hào)均為20141208。產(chǎn)地均為山西）經(jīng)山西省中醫(yī)藥研究院倪艷主任藥師鑒定為真品。
2方法與結(jié)果
2.1揮發(fā)油的提取分別稱(chēng)取一定量樣品，粉碎過(guò)1號(hào)篩，置于圓底燒瓶中，連接揮發(fā)油提取裝置，參照2015年版《中國(guó)藥典》四部“揮發(fā)油測(cè)定法”甲法提取揮發(fā)油[3]。待冷卻分層后，收集揮發(fā)油，用無(wú)水硫酸鈉脫水干燥，備用。2.2試驗(yàn)條件[4]2.2.1色譜條件色譜柱：HP-5MS（30m×0.25mm×0.25m）；進(jìn)樣口溫度：200℃；載氣：氮?dú)�；分流比�?0∶1；程序升溫：50℃（保持3min），5℃/min升至120℃（保持5min），10℃/min升至230℃（保持10min）；流速：1ml/min；進(jìn)樣量：1l。2.2.2質(zhì)譜條件離子源：電轟擊離子源；電子能量：70eV；接口溫度：280℃；離子源溫度：230℃；四極桿溫度：150℃；電子倍增電壓（EMV）：2300V；質(zhì)量掃描范圍：29～350amu。總離子流見(jiàn)圖1。2.3供試品溶液的制備精密量取“2.1”項(xiàng)下適量揮發(fā)油，用三氯甲烷稀釋并定容至量瓶中，制成體積分?jǐn)?shù)為1％的溶液。臨用前用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。2.4精密度試驗(yàn)取“2.3”項(xiàng)下供試品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下試驗(yàn)條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果，占最大峰面積5％以上的各峰面積比值無(wú)明顯差異，RSD＝4.42％（n＝6），表明儀器精密度良好。2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)取“2.3”項(xiàng)下供試品溶液（批號(hào)：20140703）適量，分別于室溫下放置0、2、4、8、12、24h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，占最大峰面積5％以上的各峰面積比值無(wú)明顯差異，RSD＝4.75％（n＝6），表明供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。2.6重復(fù)性試驗(yàn)精密稱(chēng)取同一批樣品（批號(hào)：20140703）適量，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，共6份，再按“2.1”項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，占最大峰面積5％以上的各峰面積比值無(wú)明顯差異，RSD＝4.86％（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。2.7樣品相對(duì)含量測(cè)定取樣品各適量，分別按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，對(duì)各峰進(jìn)行峰純度檢查，經(jīng)人工解析及NIST02標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)檢索定性，采用峰面積歸一化法定量分析，計(jì)算出各成分的相對(duì)含量，結(jié)果見(jiàn)表1、表2。由表1、表2可知，青翹、老翹、青翹殼、青翹心揮發(fā)油中分別有29、29、28、26種成分，扣除相對(duì)含量過(guò)低、碎片不完整、匹配度低于85％的峰，青翹、老翹、青翹殼、青翹心揮發(fā)油分別確定出26、24、24、21種成分，分別占各自揮發(fā)油總量的98.86％、98.16％、98.67％、98.02％。其中青翹與老翹揮發(fā)油有18個(gè)共有峰，分別為β-蒎烯、β-水芹烯、α-蒎烯、松油烯-4-醇、γ-松油烯、α-崖柏烯、α-松油烯、α-松油醇、鄰異丙基甲苯、月桂烯、莰烯、異松油烯、桉葉油醇、龍腦、桃金娘醇、δ-蓽橙茄烯、綠油腦、鄰苯二甲酸二丁酯，約占揮發(fā)油總量的95.76％。比董梅娟等[4]發(fā)現(xiàn)的12個(gè)共有峰增加了6個(gè)，與文獻(xiàn)報(bào)道的主成分基本一致[5-6]。青翹與老翹揮發(fā)油除了上述共有峰外，二者還存在一定差異，4-亞甲基-1-環(huán)己酮、3-環(huán)己烯-1-甲醇、對(duì)異丙基苯甲醛、香樹(shù)烯、棕櫚酸、肉豆蔻醛6種成分僅在老翹揮發(fā)油中檢出，分別約占揮發(fā)油總量的1.28％、0.45％、0.50％、0.36％、0.67％、0.25％；而α-水芹烯、羅勒烯、β-松油醇、α-松香芹酮、Z-薄荷醇、乙酸龍腦酯、α-庫(kù)比烯、大根香葉烯D8種成分則只在青翹揮發(fā)油中檢出，分別約占揮發(fā)油總量的0.24％、0.09％、0.13％、0.21％、0.10％、0.07％、0.10％、0.10％。其中，青翹揮發(fā)油中的α-水芹烯、α-松香芹酮和Z-薄荷醇存在于青翹殼和青翹心揮發(fā)油中，羅勒烯只存在于青翹心揮發(fā)油中。
3討論
筆者通過(guò)對(duì)山西產(chǎn)青翹和老翹各3批樣品揮發(fā)油化學(xué)成分的比較研究發(fā)現(xiàn)，青翹與老翹揮發(fā)油在主成分上很相似，均以倍半萜烯類(lèi)及其含氧衍生物居多，這與魏希穎等[7]報(bào)道的主要成分為β-蒎烯（47.78％）、β-水芹烯（14.91％）、α-蒎烯（14.02％）、β-傘花烴（2.18％）、D-樅油烯（1.83％）、α-崖柏烯（1.75％）、β-月桂烯（1.13％）等基本一致。但是，老翹揮發(fā)油中存在少量的4-亞甲基-1-環(huán)己酮、3-環(huán)己烯-1-甲醇、對(duì)異丙基苯甲醛、香樹(shù)烯、棕櫚酸、肉豆蔻醛等；青翹揮發(fā)油中則存在α-水芹烯、羅勒烯、β-松油醇、α-松香芹酮、順式-薄荷醇、乙酸龍腦酯、α-庫(kù)比烯、大根香葉烯D等；同時(shí)從總離子流程圖上可以看出青翹與老翹揮發(fā)油的含量及各成分之間的比例也有所不同，說(shuō)明由于采收時(shí)間的不同，青翹與老翹揮發(fā)油的積累上存在一定的差異。同時(shí)，對(duì)于青翹揮發(fā)油中的差異成分究竟存在于青翹殼還是青翹心揮發(fā)油中，筆者也做了初步研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，α-水芹烯、松香芹酮和Z-薄荷醇于青翹殼和青翹心揮發(fā)油中均存在，羅勒烯只存在于青翹心揮發(fā)油中，3-環(huán)己烯-1-甲醇、β-水芹烯、龍腦、綠油腦、鄰苯二甲酸二丁酯成分只存在于青翹殼揮發(fā)油中。至于在青翹心揮發(fā)油中發(fā)現(xiàn)的檜烯以及在青翹殼和青翹心中均未檢出的β-松油醇、乙酸龍腦酯、α-庫(kù)比烯和大根香葉烯D，可能是由于其本身量較少或者是結(jié)構(gòu)發(fā)生變化所致。此外，青翹與老翹揮發(fā)油在得率和色澤方面也存在一定差異。由試驗(yàn)結(jié)果可知，揮發(fā)油得率高低順序?yàn)榍嗦N心（5.0％）＞青翹（2.3％）＞青翹殼（0.2％）＞老翹（0.1％），可以看出青翹揮發(fā)油的得率約為老翹的23倍，青翹心揮發(fā)油的得率約為青翹殼揮發(fā)油的25倍，可見(jiàn)青翹揮發(fā)油主要來(lái)源于其青翹心，這與郝旭亮等[8]報(bào)道的連翹揮發(fā)油類(lèi)成分主要存在于連翹心中，含量在4％以上，水蒸氣蒸餾法提取的青翹出油率為2.4％基本相符。而在色澤上，青翹揮發(fā)油呈淺黃色，老翹揮發(fā)油呈橙黃色，青翹殼揮發(fā)油呈黃色，青翹心揮發(fā)油呈透明的微黃色接近無(wú)色，究其原因可能與其化學(xué)成分存在差異或某些成分受熱被氧化有關(guān)，這與周德英等[9]報(bào)道的采用超臨界萃取技術(shù)得到的青翹出油率為2.89％，老翹出油率為3.97％，青翹揮發(fā)油呈幾乎無(wú)色油狀物，老翹揮發(fā)油呈淺黃色油狀物不符，結(jié)合其他文獻(xiàn)懷疑其準(zhǔn)確性。綜上所述，青翹與老翹揮發(fā)油的主要化學(xué)成分基本一致，但也存在一定的差異，且共有成分的含量及各成分之間的比例也有所不同，該發(fā)現(xiàn)或許能夠?yàn)檫B翹藥效差異物質(zhì)基礎(chǔ)的研究提供部分依據(jù)。由于本結(jié)論僅在該試驗(yàn)條件下通過(guò)山西產(chǎn)的3批樣品分析得出，對(duì)于其他產(chǎn)地的連翹藥材是否適用，還有待進(jìn)一步研究。
參考文獻(xiàn)
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