蘇木精染液的染色力測定與評價

　　蘇木精染液的染色力主要受蘇木精的氧化狀態(tài)影響，氧化不足或過度氧化均可影響其染色力，下面是小編搜集整理的一篇探究蘇木精染液的染色力測定與評價的論文范文，歡迎閱讀參考。

　　蘇木精染液的染色力是影響HE染色成功的關(guān)鍵因素之一，而染色力隨染色時間和切片數(shù)量的增加呈進行性下降。實際工作中技術(shù)人員大多依據(jù)個人經(jīng)驗來決定蘇木精染液是否需要更換，缺乏統(tǒng)一標準，造成批間差異大。本文通過測定蘇木精染液使用過程中pH值的變化來確定染液的酸度值，評價蘇木精染液的染色力，為實際工作中蘇木精染液的更換提供量化參考指標，從而更好地開展HE染色的質(zhì)量控制。

　　1材料與方法

　　1.1蘇木精染液的配制采用常規(guī)使用的改良Lillie-Mayer蘇木精染液，具體配制方法如下[1]:蘇木精5g溶于50ml無水乙醇，50g硫酸鋁鉀充分溶于650ml蒸餾水后與蘇木精無水乙醇液充分混合，加入500mg碘酸鈉，最后加入甘油300ml和冰醋酸20ml,室溫靜置1周后備用。

　　1.2儀器實驗所用染色機為LeicaAutostainerXL,pH值測定計為sartoriusPB-10.

　　1.3方法隨機挑選胃、腸、肺、淋巴結(jié)、乳腺、肝等組織蠟塊，共10塊，每個蠟塊連切18張切片備用;用新蘇木精染液行常規(guī)HE染色，分別選取第0、500、1000、1500、2000、2500張切片時測量染液的pH值，每一時間點同步選取實驗備用片進行染色，并更換新的分化液和藍化液;更換蘇木精染液后重復本實驗2次。每批次所染切片均由2名高年資病理醫(yī)師與一名技術(shù)主管同時對所染切片進行評價，每張切片3者評價結(jié)果必須一致，評價結(jié)果不一致的切片均算不合格片，每一批10張切片中有4張切片染色評價不合格即可確定染液的染色力不夠需更換。

　　2結(jié)果

　　2.1pH值與染色切片數(shù)量的關(guān)系3次實驗中，隨著染色切片數(shù)量的增加，染液的pH值也在逐步升高。3次實驗中同一時間點染液pH值的均值與染色切片數(shù)量的關(guān)系見表1.

　　2.2pH值與蘇木精染液染色力的關(guān)系不同批次的實驗結(jié)果顯示，蘇木精染液染色力在染液pH值1.51~1.87間變化小，隨著染色切片數(shù)的增加，染液pH值逐漸升高，而染色力不斷下降;第2、3次實驗中，染液累積染色切片至2500,pH值分別達到2.65和2.71時，染色合格片分別只有6和4張(表2).

　　3討論

　　蘇木精-伊紅(HE)染色是組織與細胞學最常用的染色方法之一，蘇木精染液的染色力是影響HE染色成功的關(guān)鍵因素。蘇木精染液的染色力主要受蘇木精的氧化狀態(tài)影響，氧化不足或過度氧化均可影響其染色力。各類蘇木精染液配制方法的區(qū)別主要在氧化方法的選擇及氧化劑用量上。蘇木精染液配制過程中加入醋酸主要是調(diào)節(jié)染液pH值，當pH值處于合適范圍時，不僅可以抵消氧化劑的過度氧化、促進氧化蘇木精(即蘇木紅)與鋁鹽結(jié)合形成藍色色淀、還可維持細胞核呈酸式電離，增強細胞核的選擇性著色，減少蘇木精沉渣與氧化膜的形成[1].不同方法配制的蘇木精染液初始pH值可能不盡相同，但確保蘇木精染液的酸性環(huán)境和穩(wěn)定染液的pH值對蘇木精染液的染色力尤為重要。蘇木精染液染色力隨切片數(shù)量的增加呈漸進式下降，其可能的原因：①染液染色過程中蘇木精不斷氧化;②現(xiàn)行HE染色不論是手工還是儀器，大多采用浸染式染色方法，切片脫蠟至水化進入蘇木精染液前不可避免地帶入一些自來水，隨著染液的累積使用，使染液的pH值逐漸升高，染液的顏色和染色力隨之也不斷變化[2].為了盡可能減少由于染液的累積使用而導致染液pH值升高，有研究者在切片進入蘇木精染液前先用2%冰醋酸水溶液或10%檸檬酸水處理，以避免切片水洗后帶入自來水，很好地穩(wěn)定了染液的pH值，延長了蘇木精染液的使用時間[3].本研究3次重復試驗結(jié)果顯示：隨蘇木精染液的累積使用染液pH值不斷升高;染液pH值維持在一定范圍內(nèi)時染液的染色力穩(wěn)定，pH值超出范圍后染色力即明顯下降，說明需要更換染液。

　　參考文獻：

　　[1]彭霞。不同配方蘇木精染液染色效果觀察[J].診斷病理學雜志，2009,01:66.

　　[2]鄭明軍，馬華玲。冰醋酸在蘇木精和伊紅染色中的不同作用[J].診斷病理學雜志，2013,01:60.

　　[3]鄭明軍。組織細胞成分和染液pH值對蘇木精-伊紅染色的影響[J].實用醫(yī)技雜志，2013,20(6):668.

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