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HPLC測(cè)定VC銀翹片中連翹苷的含量
【摘要】 目的 建立VC銀翹片中連翹苷的含量測(cè)定方法。方法 采用高效液相色譜法測(cè)定，用C18柱（4.0mm×250mm，5μm），以乙腈-水（25:75）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)277nm。結(jié)果 連翹苷的線性范圍為0.4～3.0μg；連翹苷平均回收率為99.28%，RSD=2.81%(n=5)。結(jié)論 所用方法測(cè)定樣品靈敏度高，重復(fù)性好，能有效地控制VC銀翹片的質(zhì)量。
【關(guān)鍵詞】 VC銀翹片；連翹苷；HPLC；含量測(cè)定
1 儀器與試
儀器：Waters 600E液相色譜儀；Waters 600泵，Waters2997光電二極管矩陣檢測(cè)器；Millennium32色譜工作站。FA1004分析天平(上海良平儀表有限公司)，KQ3200超聲清洗器(中國(guó)昆山市超聲儀器有限公司) 。連翹苷（供含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110821-200406）。
試劑及試樣: 乙腈為色譜純,其余試劑均為分析純,水為重蒸水,VC銀翹片（自制）。
2 含量測(cè)定
2.1 色譜條件［1］ 色譜柱Symmetryshield(Rp18 4.6mm×250mm) ;乙腈-水（25:75）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)277nm；流速1ml/min；柱溫23℃。
2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取連翹苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，搖勻，即得。
2.3 樣品供試液的制備 精密稱取VC銀翹片除去糖衣研細(xì)后的粉末3.500g，置居塞錐形瓶中，精密加入甲醇45ml，稱定重量，浸漬過(guò)夜，超聲處理25min，放冷至室溫，再稱定重量，補(bǔ)加甲醇至原重量。搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液。精密量取續(xù)濾液15ml，蒸至近干，加中性氧化鋁1.5g拌勻，加至中性氧化鋁柱（100～120目，3g，內(nèi)徑1～1.5cm）上，用70%的乙醇240ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘?jiān)?0%甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至15ml容量瓶中，并用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液為供試品溶液。
2.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別精密吸取對(duì)照品溶液， VC銀翹片供試液，缺連翹的陰性樣品供試液各10μl，注入HPLC儀，按上述色譜條件測(cè)定。
2.5 線性關(guān)系考察［2］ 分別精密吸取對(duì)照品溶液2、3、5、10、15μl，按上述色譜條件，注入高效液相色譜儀，記錄峰面積。以峰面積對(duì)進(jìn)樣量（μg）回歸，得回歸方程C= 1.5812×10-6-0.04196，相關(guān)系數(shù)r =0.9999，表明連翹苷在0.4～3.0μg之間線性關(guān)系良好。
2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取VC銀翹片供試液10μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，結(jié)果峰面積的RSD=0.85%,結(jié)果表明儀器精密度良好。
2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取VC銀翹片樣品5份，按供試品制備方法制備樣品，精密吸取10μl，測(cè)定含量。結(jié)果分別為0.1789mg/片、0.1784mg/片、0.1781mg/片、0.1782mg/片、0.1786mg/片，平均含量為0.1784mg/片，RSD為0.18%。結(jié)果表明,本方法重復(fù)性良好。
2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按重復(fù)性試驗(yàn)中的1號(hào)樣，分別在2、4、6、8、12、24h測(cè)定，RSD為0.63%，結(jié)果表明，本品在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。
2.9 回收率試驗(yàn) 取已知含量的VC銀翹片（C=0.1784mg/片）加入一定量對(duì)照品，按供試品制備方法制備樣品，測(cè)定總量，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。 表1 回收率試驗(yàn)
2.10 樣品測(cè)定 取批號(hào)為050313、050201、04122三批樣品,依供試品制備方法制備供試品溶液，依上述色譜條件測(cè)定含量。其連翹苷含量分別為:0.1785mg/片、0.1780mg/片、0.1790mg/片。
3 討論
(1)本方法供試品溶液制備方法簡(jiǎn)便易行，在該色譜條件下連翹苷峰分離效果良好，回收率符合要求，結(jié)果理想。
(2)本品采用中性氧化鋁柱洗脫的方法除去雜質(zhì),把對(duì)設(shè)備的損害盡可能降到最低程度。
(3)根據(jù)對(duì)流速的考察,發(fā)現(xiàn)當(dāng)流速為1.0ml/min的時(shí)候，連翹苷分離效果更好,出峰時(shí)間更適中。
【參考文獻(xiàn)】
1 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典,2005年版一部.北京：化學(xué)出版社，2005：117～118.
2 趙子劍，趙啟鵬.復(fù)方石淋通片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.現(xiàn)代藥，2005，25（5）：69-70.
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