銀杏酸的熒光特征和光熱穩(wěn)定性研究
銀杏酸是6烷基或6烯基水楊酸的衍生物，六位上的側(cè)鏈碳原子數(shù)可從13至19，側(cè)鏈雙鍵數(shù)可為0至3個(gè)，因此，銀杏酸是一混合物，有抗菌作用。下面是小編搜集的一篇相關(guān)藥學(xué)論文范文，歡迎閱讀查看。
【摘要】目的研究銀杏酸的熒光特征，探討光、熱對(duì)銀杏酸穩(wěn)定性的影響。方法通過熒光掃描研究溶劑、pH值對(duì)銀杏酸熒光特性的影響，建立檢測(cè)銀杏酸的熒光分光光度法。結(jié)果銀杏酸在pH 4.0甲醇溶液中熒光強(qiáng)度較強(qiáng)，激發(fā)波長(zhǎng)279 nm，發(fā)射波長(zhǎng)404 nm時(shí)，銀杏酸在0.221～20.31 μg/ml濃度范圍內(nèi)與熒光強(qiáng)度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為R=0.997 5;檢測(cè)限0.023 5 μg/ml。結(jié)論銀杏酸溶液對(duì)光不穩(wěn)定，隨光照時(shí)間延長(zhǎng)濃度降低;銀杏酸溶液在5℃時(shí)穩(wěn)定，25℃時(shí)穩(wěn)定性有所下降，并隨溫度升高或加熱時(shí)間延長(zhǎng)降解率增大。該方法可用于測(cè)定光照、加熱對(duì)銀杏酸的影響。
【關(guān)鍵詞】 銀杏外種皮 銀杏酸 熒光分光度法 光穩(wěn)定性 熱穩(wěn)定性
Abstract：ObjectiveTo study the fluorescence characteristics and the heat and sunlight stability of ginkgolic acid. Methods The effects on fluorescence characteristics of ginkgolic acids with different solvent, different pH media were studied by fluorescence scan. A fluorescence spectrophotometry for determination of ginkgolic acids was established. ResultsIt was found that in the pH4.0 methanol the fluorescence signal of ginkgolic acids was strong.When the excitation and emission wavelength Ginkgolic acid were at 279 and 404 nm respectively, the linear range was 0.221～20.31 μg/ml, correlative coefficient was 0.997 5, and the detection limit was 0.0235 μg/ml. ConclusionGinkgolic acids is unstable to sunlinght. Ginkgolic acids is stable when being exposed to 5℃ condition, but its stability depressed when being exposed over 25℃ conditions. The method can be used to analyze the heat stability and sunlight stability of ginlgolic acids.
Key words： Ginkgolic acids; Fluorescence spectrophotometry; Sunlight stability; Heat stability
銀杏酸(Ginkgolic acids, GA)屬于6-烷基或者6-烯基水楊酸的衍生物，其苯環(huán)6位碳鏈長(zhǎng)度13-17，雙鍵數(shù)0-2，為5種同系物所組成的混合物，存在于銀杏的葉、果和外種皮中，以外種皮中含量為高。銀杏酸能抑制多種細(xì)菌、真菌的生長(zhǎng)，并能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡。作者發(fā)現(xiàn)銀杏外種皮石油醚提取物具有突出的殺釘螺活性[1]，銀杏酸是其中的'主要活性成分 [2]，因此銀杏酸被認(rèn)為是一種極具價(jià)值的殺螺劑或先導(dǎo)化合物。作為一種植物來源的殺釘螺劑，銀杏酸的穩(wěn)定性在其使用中具有重要的意義。而到目前為止，國(guó)內(nèi)外尚未見相關(guān)報(bào)道。
目前已報(bào)道的銀杏酸分析方法主要有HPLC-UV法[3]和HPLC-MS聯(lián)用法[4]、紫外分光光度法[5]和熒光分光光度法[6]。HPLC法測(cè)定精密度高，但對(duì)儀器要求高，分析操作復(fù)雜，成本較高;紫外分光光度法簡(jiǎn)便但靈敏度較低;而熒光分光光度法在操作簡(jiǎn)便的同時(shí)具有較高的靈敏度。田亞平[6]以白果酸為標(biāo)準(zhǔn)品采用熒光分光光度法測(cè)定銀杏外種皮中銀杏酸的含量。筆者采用從銀杏外種皮中分離的銀杏酸為標(biāo)準(zhǔn)品研究其熒光特征時(shí)，發(fā)現(xiàn)與田亞平報(bào)道有所差異，因此對(duì)銀杏酸的熒光特征進(jìn)行詳細(xì)研究，建立了熒光法測(cè)定銀杏酸的方法，研究了銀杏酸在不同溫度條件和光照下的穩(wěn)定性。
1、儀器與試劑
Cary Eclipse熒光分光光度計(jì)(美國(guó)VARIAN公司);JASCO LC-1500 高效液相色譜儀(日本分光公司)，配有PU-1580泵，PG-1580-54四通道在線脫氣，F(xiàn)P-1520熒光檢測(cè)器，N2000色譜工作站(浙江大學(xué)智達(dá)信息工程有限公司);Sartorius BS 124S 分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。銀杏酸標(biāo)準(zhǔn)品由本實(shí)驗(yàn)室自制，經(jīng)HPLC測(cè)定純度>98%(與H.Jaggy博士贈(zèng)送的分析純度99%以上的銀杏酸對(duì)照品比較)。銀杏酸標(biāo)準(zhǔn)品用無水甲醇配制成1.05 mg/ml的貯備液。銀杏酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：精密吸取1.05 mg/ml的銀杏酸貯備液用無水甲醇溶解定容于10 ml容量瓶，即配制成濃度為105 μg/ml的工作溶液。
其余試劑均為分析純，水為去離子水二次蒸餾。
2、方法與結(jié)果
2.1 溶劑對(duì)銀杏酸熒光強(qiáng)度的影響取銀杏酸標(biāo)準(zhǔn)品分別以DMF、甲醇、丙酮、乙醇、正丁醇、甲醇-水(7∶3)，乙腈為溶劑配成100 μg/ml進(jìn)行熒光掃描;實(shí)驗(yàn)溫度為(25±0.5)℃，激發(fā)和發(fā)射狹縫為5 nm，激發(fā)和發(fā)射單色器的掃描速度均為500 nm·min-1。銀杏酸標(biāo)準(zhǔn)品在不同溶劑中的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜分別見圖1。
在丙酮溶液中銀杏酸熒光特性消失;在DMF溶液中銀杏酸發(fā)生熒光淬滅;在正丁醇溶液中銀杏酸的發(fā)射強(qiáng)度很微弱。在其它4種溶液中，銀杏酸都出現(xiàn)位于229 nm和279 nm處的兩個(gè)熒光激發(fā)峰，和位于404 nm和552 nm附近的兩個(gè)熒光發(fā)射峰。比較發(fā)現(xiàn)甲醇溶液中銀杏酸激發(fā)熒光性最強(qiáng)。綜合考慮銀杏酸的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜，選擇甲醇溶液為溶劑，激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為279 nm和404 nm。
2.2 pH條件對(duì)銀杏酸熒光強(qiáng)度的影響以甲醇-水(7∶3)為溶劑，配制100 μg/ml銀杏酸標(biāo)準(zhǔn)液，分別在不同pH條件下測(cè)定其熒光強(qiáng)度。在pH值2～8之間，使用磷酸鹽緩沖體系;在pH值9.00～10.00之間，使用碳酸鹽緩沖體系，熒光測(cè)定條件同“2.1”項(xiàng)。
測(cè)定了不同pH條件下銀杏酸的相對(duì)熒光強(qiáng)度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著 pH值的增加，銀杏酸的熒光強(qiáng)度略有上升，當(dāng)pH>4時(shí)，熒光性超過儀器檢測(cè)最高值,這與文獻(xiàn)[6]報(bào)道一致。因此選擇在pH 4.0條件下進(jìn)行熒光測(cè)定。
2.3 高效液相-熒光法分析干擾物的影響色譜條件：大連Elite Sino Chrom ODS-AP色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);熒光檢測(cè)器，激發(fā)波長(zhǎng)279 nm，發(fā)射波長(zhǎng)404 nm;流動(dòng)相：甲醇-3%HAC水溶液(92∶8，V/V);流速1.0 ml/min，柱溫40℃。銀杏酸標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相-熒光色譜圖見圖2。由圖2可見銀杏酸標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相熒光圖上未見熒光雜質(zhì)，故可直接采用熒光分光光度計(jì)直接進(jìn)行測(cè)定。
2.4 熒光分光光度法的線性范圍和檢測(cè)限將銀杏酸工作液稀釋成一系列濃度，按試驗(yàn)方法分別測(cè)定在404 nm下的熒光強(qiáng)度，以熒光強(qiáng)度對(duì)相應(yīng)濃度作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。在相同條件下測(cè)定樣品溶液中銀杏酸的熒光強(qiáng)度，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算其含量。
配制一系列不同濃度銀杏酸工作液，按實(shí)驗(yàn)方法在激發(fā)波長(zhǎng)279 nm，發(fā)射波長(zhǎng)404 nm的條件下，以無水甲醇作為空白，測(cè)定銀杏酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的熒光強(qiáng)度，發(fā)現(xiàn)銀杏酸濃度在0.221～20.31 μg/ml范圍內(nèi)與熒光強(qiáng)度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，其線性回歸方程為：Y=44.19X+82.80，相關(guān)系數(shù)為R2=0.995; 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.1%(n=10)。取20份空白液測(cè)定其熒光強(qiáng)度，以3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差計(jì)算其檢測(cè)限為0.023 5 μg/ml。
2.5 準(zhǔn)確度與精密度
2.5.1 精密度考察取0.1 mg/ml銀杏酸溶液1 ml于10 ml容量瓶中，無水甲醇定容，測(cè)定其熒光強(qiáng)度，重復(fù)5次，得銀杏酸溶液的RSD為0.47%(n=5)。
2.5.2 準(zhǔn)確度考察取0.1 mg/ml銀杏酸溶液1 ml于10 ml容量瓶中，無水甲醇定容，測(cè)定其熒光強(qiáng)度，重復(fù)5次，得銀杏酸溶液的RSD為0.75%。
2.6 樣品分析
準(zhǔn)確稱取一定量的銀杏酸對(duì)照品以甲醇定容，作為樣品溶液，分別按本法和文獻(xiàn)[3]HPLC-UV分析條件進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見表1�？梢姛晒夥止夥ㄅcHPLC法測(cè)定結(jié)果基本一致，因此可以采用熒光光度法進(jìn)行樣品中銀杏酸含量的分析。表1 采用熒光光度法與高效液相色譜法測(cè)定銀杏酸結(jié)果的比較(略)
2.7 銀杏酸光、熱穩(wěn)定性準(zhǔn)確移取銀杏酸工作液15 ml于具塞比色管中，密封后分別置于5，25，40，70℃恒溫，每間隔24 h取樣，測(cè)定銀杏酸的含量，求出分解率。每處理設(shè)置3個(gè)平行。
準(zhǔn)確移取銀杏酸工作液20 ml置于直徑為9 cm的石英比色皿中，封口后將石英比色皿放置在陽光下照射(每天8 h，夜間或陰天將比色皿保存于冰箱);一份表面皿用鋁箔遮蓋，并放置在陰暗處對(duì)比。每間隔24 h定時(shí)取樣，測(cè)定銀杏酸的含量，求出分解率。光照實(shí)驗(yàn)在距離地面15 m的樓頂平臺(tái)進(jìn)行，光照時(shí)候保持石英比色試管與太陽光線成30。角，測(cè)定光強(qiáng)為35 000～65 000 Lx，黑暗對(duì)照以鋁箔包裹同樣條件下光照，每處理設(shè)置3個(gè)平行。
銀杏酸置于5，25，40，70℃恒溫水浴鍋中分別恒溫1，2，3，4，5，6 d后，銀杏酸的濃度變化見圖3～4。
由圖3 可見,銀杏酸在5℃時(shí)穩(wěn)定,濃度不發(fā)生變化;溫度升至25℃以上，隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，濃度略有下降，溫度越高，銀杏酸濃度降低越多，說明高溫對(duì)銀杏酸的穩(wěn)定性有較大影響;由圖4可見，在太陽光照射下，銀杏酸的濃度隨照射時(shí)間的延長(zhǎng)而降低。說明銀杏酸具有熱、光的不穩(wěn)定性。
3、結(jié)論
本法具有簡(jiǎn)便，檢測(cè)限低的特點(diǎn)，測(cè)定結(jié)果與HPLC法基本吻合，可用于銀杏酸純品的分析。如樣品中含有熒光雜質(zhì)，則測(cè)定前必須進(jìn)行純化。由分析結(jié)果可知銀杏酸在高溫和光照條件下不穩(wěn)定，在自然條件下能夠降解。
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