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淺析制作漿膜腔積液細(xì)胞塊的最優(yōu)方法
細(xì)胞塊技術(shù)基本原理是將樣品離心，使其中的細(xì)胞和微小組織塊濃縮后固定，石蠟包埋后切片染色觀察，下面是小編搜集整理的一篇探究制作漿膜腔積液細(xì)胞塊方法的論文范文，供大家閱讀查看。
漿膜腔積液是臨床中最為常見的一種體征，炎癥和腫瘤是引起積液的主要原因。積液性質(zhì)的診斷以往主要通過涂片進(jìn)行，但是由于常規(guī)涂片法存在涂片厚、細(xì)胞重疊、結(jié)構(gòu)不清、細(xì)胞量少、陽性檢出率低等缺點(diǎn)[1-2],使得診斷的敏感性僅為50%~78%[3].細(xì)胞塊技術(shù)基本原理是將樣品離心，使其中的細(xì)胞和微小組織塊濃縮后固定，石蠟包埋后切片染色觀察。細(xì)胞塊通過石蠟包埋后類似組織塊，可以連續(xù)切片及永久性保存標(biāo)本，彌補(bǔ)了傳統(tǒng)涂片的不足，還可以進(jìn)行進(jìn)一步相關(guān)檢測。關(guān)于細(xì)胞塊技術(shù)的應(yīng)用在文獻(xiàn)中可見零星報(bào)道，制備方式也各異，本研究通過對比四種漿膜腔積液細(xì)胞塊制作方法，試圖找到一種更適合基層醫(yī)院推廣開展的細(xì)胞塊制作方法。
1材料與方法
1.1材料收集桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2010-2012年間的漿膜腔積液標(biāo)本80例，積液量50~200ml,其中胸腔積液53例，腹腔積液27例，樣本包含略渾濁的積液35例為第一組;血性積液或渾濁的積液45例為第二組。
1.2方法把每例樣本分作4份，按下列步驟進(jìn)行操作：所有樣本在一次性10ml塑料試管中離心2000r/min,離心5min,之后將沉淀部分做以下處理①將試管內(nèi)上清液去除，加入適量95%乙醇之后再次離心2000r/min、5min,去除上清液之后，用手術(shù)剪在距試管底部沉淀物上方0.1~0.2cm處剪去上段試管，再將試管底部剪出一個(gè)小口子，便于脫水劑穿透。將裝有沉淀物的試管底端用拭鏡紙包好后放入包埋盒中(試管包埋法).②將試管內(nèi)上清液去除，盡可能用鑷子將在底部的沉淀物取出，用拭鏡紙包好后放入包埋盒中(普通離心沉淀法).③將試管內(nèi)上清液去除，用濾紙盡可能吸去多余水分，在其中加入人血清液混勻后再次離心，取沉淀物用拭鏡紙包好后放入包埋盒中。④將試管內(nèi)上清液去除，用濾紙盡可能吸去多余水分，在其中加入適量融化的瓊脂混勻，待冷凝固后，取出沉淀物放入包埋盒中。以上4種細(xì)胞塊制作完成后，均放入95%乙醇中固定1h,經(jīng)過常規(guī)脫水透明，包埋，HE制片。
1.3結(jié)果判定
1.3.1成功率判定細(xì)胞沉渣能夠制作成細(xì)胞塊，沉渣大部分能夠聚攏在2cm×2cm的范圍內(nèi)，并能夠制成切片就認(rèn)定為制作細(xì)胞塊成功，可以允許有一些沉渣散落。
1.3.2細(xì)胞塊完整性判斷細(xì)胞蠟塊制成后，細(xì)胞保留完整，結(jié)合性較好，幾乎沒有或及有少量的散落細(xì)胞，能夠完整制片，即為具有完整性。
1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析所得數(shù)據(jù)，應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，各組間比較應(yīng)用χ2檢驗(yàn)。
2結(jié)果
2.1細(xì)胞塊制作成功率對比
2.1.1第一組35例略渾濁的漿膜腔積液經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，35例略渾濁的漿膜腔積液細(xì)胞塊制作的4種方法成功率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=27.47,P<0.01).其中試管包埋法與普通離心沉淀法、血清凝聚法，普通離心沉淀法與瓊脂凝聚法、普通離心沉淀法與血清凝聚法成功率的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=21.25、4.79、16.73、6.94,P<0.01或<0.05);而試管包埋法與瓊脂凝聚法，血清凝聚法與瓊脂凝聚法制作成功率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.40、2.52,P>0.05).(表1,圖1,圖2)
2.1.2第二組45例血性或渾濁的漿膜腔積液經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，45例血性或渾濁的漿膜腔積液細(xì)胞塊制作成功率的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中普通離心沉淀法與試管包埋法、血清凝聚法、瓊脂凝聚法成功率的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2均為3.10,P>0.05).(表2,圖3,圖4)
2.2細(xì)胞塊制做完整性對比四種方法制作成功的所有細(xì)胞塊包括：試管包埋法75例，普通離心沉淀法53例，血清凝聚法67例，瓊脂凝聚法73例。
經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，細(xì)胞塊制作的4種方法完整率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=64.17,P<0.01).其中試管包埋法與普通離心沉淀法、血清凝聚法;普通離心沉淀法與血清凝聚法、瓊脂凝聚法;血清凝聚法與瓊脂凝聚制作方法完整率的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值=39.63、3.97、20.32、41.23、4.91,P<0.01或P<0.05);而試管包埋法與瓊脂凝聚法制作完整率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.07,P>0.05)(表3).
3討論
傳統(tǒng)涂片中細(xì)胞量少、涂片重疊、需要觀察范圍很大，容易導(dǎo)致漏診，而且對于細(xì)胞形態(tài)不典型的間皮細(xì)胞、轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞，尤其是對散在的癌細(xì)胞的鑒別時(shí)常很困難。文獻(xiàn)報(bào)道有高達(dá)12%的病例會(huì)遇到間皮細(xì)胞與癌細(xì)胞難以鑒別的狀況[4].這種診斷的不明確甚至可以延誤治療。細(xì)胞塊技術(shù)通過離心包埋，集中獲得了最大限度濃縮的樣本，彌補(bǔ)了傳統(tǒng)涂片的不足之處，細(xì)胞塊石蠟包埋切片收集到的有核細(xì)胞多、細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，與常規(guī)涂片法相結(jié)合，可以大大提高細(xì)胞學(xué)的陽性檢出率，對細(xì)胞量較少或診斷困難的標(biāo)本意義更大。而且細(xì)胞塊通過石蠟包埋后，可以進(jìn)行特殊染色、免疫組化甚至分子病理學(xué)檢查。
本研究收集80例漿膜腔積液樣本，包括略渾濁的積液35例，血性或渾濁積液45例，對比試管包埋法、普通離心沉淀法、血清凝聚法和瓊脂凝聚法四種漿膜腔積液細(xì)胞塊制作方法在常見的積液中制備細(xì)胞塊的成功率以及細(xì)胞塊制備的完整性。研究結(jié)果顯示：在第一組略渾濁的積液中，試管包埋法與普通離心沉淀法、血清凝聚法，普通離心沉淀法與瓊脂凝聚法，普通離心沉淀法與血清凝聚法成功率的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=21.25、4.79、16.73、6.94,P均<0.01或P<0.05);而試管包埋法與瓊脂凝聚法，血清凝聚法與瓊脂凝聚法制作成功率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.40、2.52,P均>0.05).說明在略渾濁的積液中，成功率較高的是試管包埋法、瓊脂凝聚法以及血清凝聚法，而普通離心沉淀法雖然方法最為簡單，但成功率與前三者比較具有差異性。此外，對于略渾濁樣本，我們發(fā)現(xiàn)僅僅通過一次離心獲取細(xì)胞塊的成功率很低，有時(shí)需要多管離心，將沉淀物匯總后二次離心，這樣所需的細(xì)胞數(shù)量便會(huì)增多，有利于細(xì)胞塊的制備。但是，在實(shí)際工作中我們發(fā)現(xiàn)略渾濁積液往往屬于漏出液，由腫瘤引起的可能性非常低，因此盡管四種方法在制備澄清積液細(xì)胞塊的成功率不同，但是實(shí)際在診斷活動(dòng)中需要制備成細(xì)胞塊的情況比較少，使用率比較低。
在血性或渾濁的積液中，四種方法制成細(xì)胞塊的成功率都在93.3%以上，比較沒有差異性(P>0.05).說明用任一種方法都能較為成功的制成細(xì)胞塊。由于血性或渾濁積液多為滲出液，由腫瘤或其他特殊感染等原因?qū)е碌目赡苄栽黾�，因此能夠采用四種方法成功制備出細(xì)胞塊有其實(shí)際意義。
此外，本研究還對四種方法制作成細(xì)胞塊的完整性進(jìn)行了對比，比較哪一種細(xì)胞塊蠟塊制作形態(tài)更為完整。數(shù)據(jù)顯示，試管包埋法與普通離心沉淀法、血清凝聚法;普通離心沉淀法與血清凝聚法、瓊脂凝聚法;血清凝聚法與瓊脂凝聚法制作方法完整率的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值=39.63、3.97、20.32、41.23、4.91,P均<0.01或P<0.05);而試管包埋法與瓊脂凝聚法制作完整率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.07,P>0.05).說明，在細(xì)胞塊制成完整性方面，試管包埋法與瓊脂凝聚法都能夠較為完整地保存細(xì)胞成分，且制成的細(xì)胞塊、切片形態(tài)較為完整，其效果優(yōu)于血清凝聚法、普通離心沉淀法。而普通離心沉淀法對于完整性的保存效果最差。細(xì)胞塊的完整性直接決定制作成的切片的完整性，如果結(jié)構(gòu)較為松散，不易于連續(xù)切片，切片容易掉片，尤其在需要高溫水煮的免疫組化指標(biāo)的制備過程中，掉片情況會(huì)更為顯著，易造成有效成分丟失和假陰性結(jié)果。
四種方法中，以普通離心沉淀法最為簡單，試管包埋法和血清凝聚法次之，瓊脂凝聚法操作步驟最為復(fù)雜。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們建議，在細(xì)胞成分不太多的略渾濁的漿膜腔積液樣本中，使用試管包埋法、瓊脂凝聚法，對于沉淀較少的樣本可以采取多管離心從而加大樣本量。而對于細(xì)胞成分豐富的血性或渾濁的漿膜腔積液樣本，四種方法都可采用，但試管包埋法由于其操作簡單、細(xì)胞塊形態(tài)完整性高，是較為理想的選擇，值得在基層醫(yī)院推廣。
參考文獻(xiàn)：
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