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關(guān)于羅格列酮對(duì)慢性阻塞性肺疾病大鼠模型的影響論文
吸煙和感染與慢性阻塞性肺疾病( COPD) 的發(fā)生有重要關(guān)系。吸煙導(dǎo)致肺部氧化應(yīng)激，焦油是一種有效的金屬鰲合劑，它和鐵離子反應(yīng)迅速形成過氧化亞硝酸鹽過氧化物; 這些氧化物質(zhì)通過不同途徑刺激肺內(nèi)炎癥反應(yīng)，激活中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞導(dǎo)致蛋白酶釋放引起肺組織損傷。過氧化物酶體增生劑激活的受體( PPAR) γ 主要表達(dá)在脂肪細(xì)胞，成為調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞分化的重要轉(zhuǎn)錄因子，PPARγ 可在全身多組織細(xì)胞中表達(dá)，其高表達(dá)可發(fā)揮重要的抗炎、抗增生和抗腫瘤作用。羅格列酮是人工合成的PPARγ 激動(dòng)劑，本實(shí)驗(yàn)室采用被動(dòng)吸煙聯(lián)合氣管內(nèi)滴入脂多糖( LPS) 的方法復(fù)制COPD 模型，同時(shí)給羅格列酮有減輕COPD 炎癥反應(yīng)的作用，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究了羅格列酮對(duì)大鼠一氧化氮( NO) 、超氧化物歧化酶( SOD)和丙二醛( MDA) 的含量影響，探討其防治的作用機(jī)制。
1 材料和方法
1. 1 動(dòng)物分組及模型制作
健康SD 大鼠24 只，體重200 ～250 g，雌雄各半，購(gòu)自大連醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心。隨機(jī)分成對(duì)照組、模型組和羅格列酮組，每組8 只，對(duì)照組不作任何處理。模型組于實(shí)驗(yàn)第1、14 天氣管內(nèi)滴入大腸桿菌LPS 200 μg /0. 2 ml，于第2 ～ 28 天( 第14 天除外) 每天于密閉箱內(nèi)熏煙，每次20 支，每天1 h。治療組在每天熏煙前予以羅格列酮20 μg /只灌胃。第29 天殺死大鼠制備肺組織勻漿。
1. 2 試劑盒
SOD 試劑盒( 批號(hào)20031009) ，MDA 試劑盒( 批號(hào)20030927) ，NO 試劑盒( 批號(hào)20030924) ，均由南京建成生物工程研究所提供。
1. 3 藥物
大腸桿菌LPS，為Sigma 公司產(chǎn)品; 羅格列酮由葛蘭素公司生產(chǎn)。
1. 4 制備
肺組織勻漿于第29 天將3 組大鼠腹腔麻醉，取兩側(cè)肺組織放在冰冷的生理鹽水中漂洗，濾紙拭干，稱重。加入0. 86%的預(yù)冷生理鹽水，剪碎組織塊并倒入玻璃勻漿器中，充分研磨使組織勻漿化。將制備好的勻漿液以3 000 r /min 離心15 min，移取上清液在- 20℃下冷凍待檢。
1. 5 NO、SOD 和MDA 的測(cè)定
NO 采用硝酸還原化學(xué)比色法，SOD 采用黃嘌呤氧化酶法，MDA 采用硫代巴比妥酸比色法檢測(cè)，嚴(yán)格按照試劑盒說明操作，為了避免實(shí)驗(yàn)干擾因素，肺組織勻漿中所測(cè)物質(zhì)含量均以實(shí)測(cè)值與總蛋白比值表示。
1. 6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
數(shù)據(jù)用SPSS11. 5 軟件進(jìn)行方差分析。
2 結(jié)果
2. 1 羅格列酮對(duì)COPD 大鼠肺組織MDA 含量的影響
模型組大鼠肺組織中MDA 含量較對(duì)照組明顯升高〔( 4. 53 ± 1. 21)vs( 3. 11 ± 0. 64) μmol /mg，P < 0. 01〕，羅格列酮組大鼠肺組織中MDA 的含量〔( 2. 60 ± 0. 94) μmol /mg〕較模型組明顯降低( P<0. 01) 。
2. 2 羅格列酮對(duì)COPD 大鼠肺組織SOD 含量的影響
與對(duì)照組比較羅格列酮組、模型組大鼠肺組織中SOD 含量較明顯降低〔( 11. 88 ± 3. 45) vs( 23. 83 ± 3. 80) nU/mg，P < 0. 01〕，羅格列酮組SOD 含量高于模型組〔( 22. 7 ± 8. 3. 44 ) nU/mg，P<0. p="">0. 05) 。2. 3 羅格列酮對(duì)COPD 大鼠肺組織NO 含量的影響與對(duì)照組比較模型組大鼠肺組織中NO 含量較明顯降低〔( 2. 66 ±0. 94) vs( 4. 76 ± 0. 83) ，P < 0. 01〕，羅格列酮組NO 含量高于模型組〔4. 34 ± 1. 21，P < 0. 01〕，而與對(duì)照組無差異( P > 0. 05) 。
3 討論
炎癥、氧化應(yīng)激和蛋白酶-抗蛋白酶失衡及其相互影響在COPD 的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用，感染和細(xì)菌毒素等引起炎癥反應(yīng)，炎癥直接對(duì)氣管、肺組織損傷外，LPS 可通過多種機(jī)制激活中性粒細(xì)胞，后者發(fā)生呼吸爆發(fā)釋放氧自由基，氧自由基攻擊生物膜中的多價(jià)不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，形成脂質(zhì)過氧化物，其中最重要的是MDA，MDA 質(zhì)量分?jǐn)?shù)變化可反映肺脂質(zhì)過氧化的程度。引發(fā)強(qiáng)烈的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)引起細(xì)胞損傷，對(duì)組織細(xì)胞產(chǎn)生較大的破壞作用，其含量高低間接反映機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度。SOD 是廣泛存在于需氧代謝細(xì)胞中的一種自由基清除劑，其活力可反映機(jī)體清除自由基的能力。NO 是由氣道和肺的上皮，內(nèi)皮細(xì)胞以及炎癥細(xì)胞包括肺泡巨噬細(xì)胞等合成和釋放的一種生物活性因子，與多種呼吸疾病及其他疾病的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。過量的NO 可產(chǎn)生過氧亞硝基陰離子( OONO-) 自由基，導(dǎo)致細(xì)胞壞死，這種現(xiàn)象呈濃度，時(shí)間依賴性。低濃度的NO 促進(jìn)細(xì)胞凋亡，NO 含量過低可以造成血管過度擴(kuò)張和滲漏，氣道充血，加重氣道炎癥反應(yīng)和組織損傷。本研究說明模型組大鼠炎癥細(xì)胞處于激活狀態(tài)，體內(nèi)產(chǎn)生大量自由基，脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增強(qiáng)，致使其反應(yīng)產(chǎn)物MDA 增多; 肺部慢性炎癥時(shí)，由于肺泡支氣管上皮細(xì)胞損傷，合成SOD 與NO 能力不足，不能產(chǎn)生足夠的SOD 和NO，MDA 含量增多，SOD 活性，NO 含量下降，意味著機(jī)體進(jìn)入失代償狀，NO 質(zhì)量分?jǐn)?shù)變化也在一定程度上反映巨噬細(xì)胞的功能變化; 羅格列酮能夠抑制炎癥產(chǎn)生超氧陰離子自由基對(duì)生物膜中的多價(jià)不飽和脂肪酸的攻擊，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，形成脂質(zhì)過氧化物減少，所以使MDA 的含量降低; 治療組肺組織中SOD、NO 含量均高于模型組，說明羅格列酮類藥物均能增強(qiáng)SOD 活性，從而催化超氧陰離子自由基歧化反應(yīng)生成H2O2，在過氧化氫酶( AT) 的作用下，H2O2轉(zhuǎn)變成H2O 和O2，保護(hù)機(jī)體組織免受損害; 提高NO 含量，從而提高機(jī)體抗氧化損傷能力，減輕氣道炎癥反應(yīng)。
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