植物激素對附子多糖含量的影響

時間：2024-10-09 10:52:29 醫(yī)藥學(xué) 我要投稿

植物激素對附子多糖含量的影響

　　植物在生長的過程中受到內(nèi)源激素(或外源激素)的調(diào)節(jié)作用，因此在植物的栽培過程中激素對其生長發(fā)育、生理生化、產(chǎn)量、品質(zhì)、次生代謝產(chǎn)物等都可能會產(chǎn)生作用。

植物激素對附子多糖含量的影響

　　【摘要】 目的研究植物激素對附子多糖含量的影響。方法在附子的苗期和子根膨大期噴施不同的激素，采用蒽酮-硫酸比色法測定多糖含量。結(jié)果不同的激素間差異明顯，赤霉素(GA)、α-萘乙酸(NAA)對多糖含量的增加也有作用;6-芐氨基嘌呤(6-BA)和6-糠氨基嘌呤(KT)對多糖含量的增加也有作用;吲哚乙酸(IAA)有抑制影響。結(jié)論植物激素對附子多糖的含量有顯著的影響。

　　【關(guān)鍵詞】植物激素; 附子; 多糖

　　Abstract：ObjectiveTo study the effects of plant hormones on the determination of polysaccharide of Aconitum carmichaili.MethodsThe plant hormones were sprayed on the Aconitum carmichaili at the seedling growing period and tubers expanding period.The anthrone-sulfuric acid colorimetry was used to determine the polysaccharide.ResultsThe results showed that there was significant difference between the treatments.The effect on the increment of the content of polysaccharide with the treatments of GA and NAA were significant.6-BA and KT also improved the content of polysaccharide,but IAA had inhibitory effect on it.ConclusionThe effects of plant hormones on the determination of polysaccharide of Aconitum carmichaili are singificant.

　　Key words：Plant hormones; Aconitum carmichaili; Polysaccharide

　　附子是我國常用的中藥，為毛茛科烏頭Aconitum carmichaeli Deb.的子根，附子的主要有效成分為烏頭類生物堿:烏頭堿(aconitine)、中烏頭堿(mesaconitine) 與次烏頭堿(hypaconitine)等，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、強(qiáng)心、抗心律失常、降血糖等藥理作用, 有回陽救逆、補(bǔ)火助陽、散寒除濕的功效 [1，2]。中草藥多糖在增強(qiáng)機(jī)體免疫功能及抗腫瘤、抗肝炎、抗?jié)�、調(diào)血脂、降血糖、抗衰老方面都有作用[3]。附子多糖提取液還具有抗癌、抗衰老和增強(qiáng)免疫機(jī)能等作用[4]。附子多糖高效低毒的生物學(xué)特性,近年來逐漸受到了人們的關(guān)注，是人們新藥研發(fā)方向之一。植物激素作為化控技術(shù)在農(nóng)業(yè)上發(fā)揮了重要的作用,對藥用植物次生代謝產(chǎn)物也有影響，但在附子上的研究尚未開展。因此，研究激素對多糖含量的影響，對附子的栽培管理、標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)和藥用價值的利用都有重要的意義。

　　1 材料與儀器

　　1.1 材料試驗材料來自四川江油附子GAP基地的主要栽培種，由侯大斌教授鑒定。隨機(jī)區(qū)組設(shè)計，重復(fù)3次，種植在西南科技大學(xué)校內(nèi)實驗田。試驗田土壤特性：全氮含量為0.14%，速效氮含量為111.50 mg/kg，速效磷含量為32.785 mg/kg，速效鉀含量為89.29 mg/ kg,有機(jī)質(zhì)5.19 mg/kg。底肥：農(nóng)家肥30 000 kg/ha，油枯3 000 kg/ha，高效磷肥750 kg/ha，按附子生產(chǎn)要求進(jìn)行田間管理，每月除1次草。激素選用：GA(60 mg/L)，6-BA(40 mg/L)，NAA (30 mg/L)，IAA(20 mg/L)，KT (25 mg/L)，對照(清水)，分別在苗期和子根膨大期噴施，06-27收獲。

　　收獲附子先用自來水清洗干凈，在用蒸餾水漂洗兩次，裝入牛皮紙袋放入烘箱，在105℃下烘30 min，再在60～70℃下烘干至恒重，粉碎過60目篩，4℃冰箱保存，備用。

　　1.2 儀器設(shè)備、試劑旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(Buchi公司)，BP211D電子分析天平(Storis公司)，T6普析通用新世紀(jì)紫外分光光度計(北京普析)，高速冷凍離心機(jī)(Backman公司)，中藥切片機(jī)(長沙中南制藥機(jī)械廠)、中草藥粉碎機(jī)(天津泰斯特儀器有限公司)。

　　無水乙醇，丙酮，乙醚，氯仿，正丁醇，濃硫酸，蒽酮，葡萄糖等，以上試劑均為分析純。

　　2 方法

　　2.1 附子多糖的提取[5，6]稱取干燥的附子粉200 g,加入適量80%乙醇,回流提取3 h,抽濾，藥渣揮盡乙醇后,沸水提取2次,1 h/次,合并提取液,濃縮至200 ml,加95% 乙醇使醇含量達(dá)到80% ,于4℃冰箱中醇沉過夜，離心(5 000 r/min，10 min)，沉淀依次用無水乙醇、丙酮洗滌,得到粗多糖。用熱水將粗多糖溶于水,用Sevage法(氯仿∶正丁醇=5∶1)除蛋白,重復(fù)3次(用考馬斯亮藍(lán)法測得無蛋白為止)。流水透析后, 蒸發(fā)濃縮至200 ml, 加95%乙醇使醇含量達(dá)到80% ,于4℃冰箱中醇沉過夜。離心,沉淀依次用無水乙醇、丙酮洗滌,真空干燥，稱重計算得率。

　　2.2 多糖含量的測定采用蒽酮-硫酸法[7]。以糖濃度(C，μg /L)為橫坐標(biāo)，吸光度(A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程A=0.005 2X-0.002 7,r=0.999 2，葡萄糖在20～100 μg/L與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

　　2.3 換算因子的測定精密稱取附子多糖100 mg,溶于1L容量瓶中,稀釋至刻度,搖勻。精密吸取1 ml于具塞試管中,按照蒽酮-硫酸法方法測定吸光度,根據(jù)回歸方程計算多糖濃度中葡萄糖的濃度C,按下式計算出換算因子f。f= C·D/W。式中W為多糖質(zhì)量(mg) , C為葡萄糖濃度(μg /ml) ,D為稀釋倍數(shù)。測得換算因子f= 4.83 ( n= 5,RSD=2.67%)。

　　2.4 樣品溶液的制備精密稱取不同處理的附子樣品1.0 g(n=3)，加入150 ml 80 %乙醇回流提取3 h,抽濾，殘渣揮盡乙醇后,用100 ml水提取1 h, 2次,離心，定容至250 ml的容量瓶中,為樣品液。

　　2.5 精確度實驗精密稱取附子粉5份，每份1 g，按照“2.4”項下的方法同時制取5份樣品溶液。精密移取各樣品溶液各1 ml分別置于具塞試管中，按照“2.2”項下的方法測定吸光度，計算附子多糖含量。測得RSD=1.83%(n=5),說明該分析方法精密度良好。

　　2.6 穩(wěn)定性實驗按“2.4”項下樣品溶液制備方法制備，吸取1 ml試液于具塞試管中，按照“2.2”下的方法測定吸光度，每隔1 h測定1次，連續(xù)6 h，考察其穩(wěn)定性。測得吸光度在6 h內(nèi)無明顯變化，穩(wěn)定性較好(RSD=1.70%)。

　　2.7 數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)用SAS軟件進(jìn)行方差分析和最小顯著差數(shù)法(LSD)分析。

　　3 結(jié)果

　　3.1 精制多糖的得率干燥的附子粉200 g,得到精制多糖10.82 g,得率為5.41%(n=3)。

　　3.2 回收率的測定精密稱取5份附子樣品液各1.0 g,分別加入30 mg左右的附子多糖,按照“2.4”項下樣品溶液的制備和“2.2”項下的測定方法操作,測得吸光度,計算回收率(R)�；厥章蔙=90.4%，RSD=1.58%(n=5)表1 回收實驗結(jié)果

　　3.3 植物激素對附子多糖含量的影響精密吸取“2.5”項下樣品液1 ml于具塞試管中，按照蒽酮-硫酸法測定吸光度，按回歸方程計算樣品液中葡萄糖的濃度，按照下面公式計算附子粉中多糖的含量。樣品中含量(% ) = (CD /W Rf) ×100%。式中: C為樣品液中葡萄糖的濃度, D為稀釋倍數(shù), f為換算因子, W為樣品質(zhì)量,R為回收率。各處理樣品中多糖含量和方差分析表見表2。表2 方差分析表

　　激素對附子多糖的含量的影響見表3。區(qū)組間的方差分析可知，F(xiàn)=0.091F0.05,說明不同的激素間差異具有明顯的差異性，多糖對不同激素的敏感性存在差異。GA，NAA對多糖含量的提高最為顯著，平均含量分別是37.00 ，36.40 mg/g，比對照增加了10.68%，8.88%，與其它激素和對照的差異達(dá)到極顯著;兩種細(xì)胞分裂素對多糖含量的影響也有顯著的增加，但作用低于GA,NAA，含量分別為35.02 mg/g和34.90 mg/g，增加量分別是4.76%，4.40%和對照的差異也達(dá)到極顯著。IAA對多糖含量有明顯的抑制作用，多糖含量僅為32.13 mg/g。幾種激素的作用效果GA，NAA>KT，6-BA>CK>IAA。表3 激素對附子多糖含量影響分析

　　字母表示處理間的差異顯著水平，相同的字母表示兩處理間沒有差異，不同的字母表示兩處理間差異顯著，大寫字母表示差異極顯著(1%)，小寫字母表示差異顯著(5%)

　　4 討論

　　植物在生長的過程中受到內(nèi)源激素(或外源激素)的調(diào)節(jié)作用，因此在植物的栽培過程中激素對其生長發(fā)育、生理生化、產(chǎn)量、品質(zhì)、次生代謝產(chǎn)物等都可能會產(chǎn)生作用。多糖作為附子有效成分之一，是評價附子藥用價值的主要標(biāo)準(zhǔn)之一。目前對多糖含量的測定使用的方法還主要是經(jīng)典的紫外比色法，通過驗證，該方法具有較好精密度和穩(wěn)定性，回收率也較高，是檢測多糖含量的優(yōu)良的方法之一。通過實驗可以發(fā)現(xiàn)，激素對多糖的含量有調(diào)節(jié)作用。除IAA外其它幾種激素對多糖含量都有明顯的增加作用，說明IAA的作用具有不穩(wěn)定性，這與前人研究的激素IAA的調(diào)節(jié)作用具有不穩(wěn)定性比較相似[8]。IAA在植物生長的不同時期易受到吲哚乙酸氧化酶的破壞而失去作用，對植物的生長發(fā)育產(chǎn)生有影響，可能是抑制多糖含量的原因之一。由于激素對植物生長調(diào)節(jié)機(jī)理目前還不是很清楚，激素對多糖含量的影響還有待進(jìn)一步研究。

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